Diagnostykę PCR - analiza zakażenia


Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) - bardzo dokładna metoda diagnostyki genetycznej molekularnej, która pozwala wykrywać różne osoby i dziedzicznych chorób zakaźnych, ostre i przewlekłe scenie i na długo przed choroba może objawiać.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w 1983 roku opracowany Myullisa Cary (USA), dla których w 1993 roku otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii.

PCR dla większości zakażeń stać się swego rodzaju "złoty standard". Większość specjalistów do czynienia z nim prawie codziennie i nie wyobrażam sobie bez ostatecznej diagnozy. PCR staje się często jedynie reakcją na identyfikację aktywnych etapów choroby w tych momentach, kiedy inni zawodzą, bakteriologiczne, wirusologiczne immunologicznych metod diagnostycznych.


Zalety diagnostyce PCR w nowoczesnej medycynie:

• bezpośrednie wykrywanie obecności patogenu (czyli konkretnych obszarów DNA lub RNA) patogenu w próbce.
• Wysoka specyficzność można określić unikatowy odcinek DNA lub konkretnego do patogenu, co eliminuje możliwość fałszywych reakcji RNA.
• Wysoka czułość PCR pozwala wykryć nawet pojedyncze komórki patogenów (wirusy, bakterie). Czułość analizy PCR jest 10-1000 komórek w próbce (np czułości testów immunologicznych i mikroskopijnych - tylko 103-105 komórek).

• Opracowanie metody PCR do wykrywania uniwersalne różnych patogenów. Przedmiotem badania dla PCR materiał genetyczny (DNA, RNA) z pasożyta. Technika wykrywa wiele patogenów z próbki biologicznej.
• Dość gwałtowne wyniki badań. Pełna Badania przeprowadzone dla 4-4,5 godziny, co najmniej - niektóre dłużej.
• Zdolność do identyfikacji patogenów do powstania objawów (przedklinicznych diagnoza) i po diagnozie choroby przeszłości (retrospektywne). Przykłady przedkliniczne diagnoza zostanie zbadane w okresie inkubacji (od momentu zakażenia do pacjenta skarg) i utajonego zakażenia (jeśli w ogóle żadnych objawów, ale nie ma dowody laboratoryjne - PCR, na przykład). Jedną z głównych atrakcji jest w PCR PCR diagnostyczne lub pozostałości materiałów archiwalnych ważnych dla identyfikacji biologicznych lub ojcostwa.

Diagnostyka jest obecnie znacznie PCR rozwoju. Jest poprawa sposobu, czasu i znowu pojawiają się nowe rodzaje PCR, rynek medyczny wkracza w nowy system testowy dla tej reakcji. Ten koszt badania PCR rocznie staje się bardziej dostępne w szerokim zakresie pacjentów.

Co oparty PCR

Podstawa reakcji łańcuchowej polimerazy powtórzono dwukrotnie (amplifikacji) pewnych odcinkach DNA lub RNA przez enzymy w laboratorium. Powoduje to ilość DNA lub RNA, wystarczającą do analizy wizualnej. Badanie jest kopiowany tylko fragment, który pasuje do określonych warunkach i tylko w obecności swojej sytuacji w badanej próbce.

Na przykład, materiał do badania, która zapewnia obecność fragmentów DNA lub RNA, patogenu (ślina, krew, mocz, wyciek z narządów płciowych), umieszczone w specjalnym reaktorze (termocyklerów). Obok dodaje specyficznych enzymów, które wiążą się z patogenu DNA lub RNA i syntezę kopii. Ta kopia jest kilka kroków typu "reakcję łańcuchową", a kończy się z jednej kopii materiału genetycznego może wyprodukować setki tysięcy egzemplarzy. Potem przychodzi analizę i porównanie wyników z dostępnej bazy danych na temat struktury różnych patogenów. PCR z użyciem nie tylko zidentyfikować typ patogenu, ale także dają wynik analizy ilościowej, czyli jak wiele czynników chorobotwórczych u ludzi.

PCR jest teraz rozszerza zakres możliwości studiów: wprowadzenie mutacji, fuzja fragmentów DNA i rozpowszechniona w medycynie, na przykład, ustalenie ojcostwa, pojawienie się nowych genów i więcej.

Co infekcje mogą być wykryte przez diagnostykę PCR

1) HIV (może wykryć ludzkim wirusem niedoboru odporności HIV-1)
2) wirusowe zapalenie wątroby typu A, B, C, G (RNA-HAV, HBV-DNA, RNA HCV-RNA-HGV)
3) Mononukleoza zakaźna (wirus Epsteina-Barr DNA -VEB)
4) zakażenie Tsytomehalovyrusnaya (DNA-CMV)

5) zakażenia opryszczkowe (herpes simplex virus DNA HSV 1 i 2)
6) choroby przenoszone drogą płciową (infekcje, choroby przenoszone drogą płciową) - ureaplasmosis, gardnerellez, chlamydia, mykoplazmozy, rzęsistkowica,
7) gruźlicy (Mycobacterium tuberculosis)
8) wirusów onkogennych - zakażenie wirusem (wirus brodawczaka ludzkiego (w tym jego onkogennych typów 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 i 59)
9) borelioza, kleszczowe zapalenie mózgu
10) Listerioza
11) Kandydoza (grzyby z rodzaju Candida)
12) zakażenie pylori (H. pylori)

i inne

Biorąc pod uwagę zakres patogenów PCR Diagnostics szeroko stosowane w praktyce ginekologicznej, prostaty, praktyce, chorób zakaźnych, pulmonologii, gruźlicy, gastroenterologii, hematologii, onkologii i innych.

Materiał do badań i zasad ogrodzenia

Materiał do badania PCR można wykryć, że bakterie, obcy DNA lub RNA lub DNA mogą służyć do różnych płynów biologicznych i prawa ochrony środowiska: śluzu, krwi, moczu, plwociny, skrawków komórek nabłonkowych, łożysko, tkanki soku prostaty, krwi, płynu owodniowego, płynu opłucnej.

Badanie na infekcje, choroby przenoszone drogą płciową (STI) wśród kobiet i mężczyzn wspinać wydzielina z narządów płciowych lub skrobanie wymaz z szyjki macicy, skrobanie lub wymaz z cewki moczowej (cewka moczowa), moczu.

Badanie na infekcje (infekcje opryszczki, CMV, mononukleoza, toksoplazmoza, zapalenie wątroby typu B i C, zakażenia wirusem HIV) PCR na krwi podjęte.

Dla rozpoznania mononukleozy zakaźnej CMV zakażenia opryszczki wymazie z gardła pochodzi z badań na CMV - moczu. Często do badania na układ nerwowy w szeregu badań wykonanych płynu mózgowo-rdzeniowego.

W materiale pulmonologii jest plwociny, wysięk płynu.

Egzamin na zakażenia wewnątrzmacicznego - płynu owodniowego, tkanki łożyska.

Przygotowanie do materiału depozytowej i diagnostyce PCR

Prawie wszyscy pacjenci, którzy wykonywali PCR diagnostykę, liczyć na rzetelnych, dokładnych i szybkich wyników, które w dużej mierze zależy od zdolności laboratorium, profesjonalnych lekarzy laboratoryjnych. Jednak wielu nie sądzę, że jest to w dużej mierze zależy od wiarygodności nas, a mianowicie zalecenia lekarza, stylu życia i dokładnego zebrania materiału. W zbiorze materiałów niezbędnych warunków wykluczających kontaminacji (zanieczyszczenia) materiału, a zatem w wątpliwość obiektywność analizy.

Właściwe przygotowanie do dostarczenia materiału nie przedstawia większych trudności. Poniższe zalecenia lekarzy dla pacjentów:

1) były aktywne seksualnie w dzień dostawy materiału;
2) badanie krwi pojawia się rano na czczo (nie jeść, nie pić);
3) w czasie moczu zebranego w części rano pierwszego czystego sterylnym pojemniku.

Warunki gotowość PCR

Efektem końcowym jest gotowy w 1,5-2h dni po dostarczeniu materiału. W niektórych przypadkach, wynikiem jest gotowy na pierwszy dzień.

Objaśnienie PCR

Negatywny Wynik PCR wskazuje, że badany materiał w momencie dostawy nie znaleziono żadnych śladów czynników zakaźnych. W większości przypadków nie wykazuje infekcji, która próbowała znaleźć w próbce badanej.

Pozytywny PCR wskazuje, aby wykryć objawy infekcji w badaniu próbki biologicznej. Z wielką precyzją pozytywnego wyniku wskazuje na obecność zakażenia w danym momencie.

Istnieją sytuacje, w których wykryto PCR dodatnie dla aktywnego zakażenia i nie można mówić - tak zwany "nośnik" zdrowy bez objawów klinicznych choroby, które nie wymagają leczenia, ale wymaga obserwacji przez lekarza. Jest więcej w wielu infekcji wirusowych (HPV, CMV zakażenia EBV, zakażenie herpes, etc.) na materiałach takich jak ślina, zgarniania szyjki macicy, cewki, lokalnej czyli ostrości. Nie możemy jednak zapominać, że transmisji medialnych dostępnych dla osób zdrowych, jako przejście do przewlekłej postaci choroby z procesu aktywacji. Jeśli PCR pozytywnej krwi, nie jest nośnik i wymaga szczególnego traktowania.

Quantitative PCR ocenia się przez lekarza indywidualnie dla danego zakażenia oddzielnie i nie są udostępniane tonalne. Na podstawie ilościowej lekarza PCR może ustalić stopień aktywności zakażenia i ustaw stadium choroby, które z pewnością wpływa na przebieg i przeznaczone dawek leków.

Jednym z najnowszych ciekawych pytań: jak dokładne rozpoznanie PCR?

Do analizy PCR, są 3 definicje:

1. Dokładność (z dużym prawdopodobieństwem może określić lub brak infekcji).

2. specyficzność (dokładność wykrywania określonego zakażeniu).
3. Czułość (nawet przy niskiej zawartości materiału genetycznego patogenów w próbce wykryto infekcji).

Reakcja łańcuchowa polimerazy praktycznie nie daje wyników fałszywie dodatnich (czyli nie ma dodatnie testy, gdzie nie ma infekcji). Fałszywie ujemne wyniki są rzadkie (często jest to spowodowane brakiem aktywnego zakażenia u ludzi, w tym momencie). Na przykład, latentnego zakażenia, przewlekłe zakażenie aktywność zewnątrz.